pcr反应反应引物设计原则是什么

问题描述

精选答案

. 引物最好在模板cDNA的保守区内设计。

2. 引物长度一般在15~30碱基之间。

3. 引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃。

4. 引物3′端要避开密码子的第3位。

5. 引物3′端不能选择A，最好选择T。

6. 碱基要随机分布。

7. 引物自身及引物之间不应存在互补序列。

8. 引物5′端和中间△G值应该相对较高，而3′端△G值较低。

9. 引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰。

10. 扩增产物的单链不能形成二级结构。

11. 引物应具有特异性。

其他回答

四川自考助手

PCR引物设计原则PCR是目前研究DNA、RNA等核酸的非常有效和最主要的方法之一。它的原则主要是在模板cDNA的传统区域内设计方案、引物长短一般在15~30碱基中间、引物GC成分在40%~60%中间，Tm 值最好是贴近72℃、引物3′端要绕开密码子的第3位、引物3′端不可以挑选A，最好是挑选T等等。

首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配) ，再次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构。