alp测定有哪些方法

问题描述

精选答案

（1）比色法：ALP在碱性条件下使磷酸苯二钠水解，生成磷酸和游离酚，后者与4-氨基安替比林作用，并经铁氰化钾氧化成红色醌类化合物，其颜色的深浅与ALP活性成正比。

（2）连续监测法：ALP在碱性条件下，使磷酸对硝基苯酚（4-NPP）释放出磷酸基团，AMP参与磷酸酰基的转移，促进酶反应速率，生成游离的对硝基苯酚（4-NP），并形成黄色的醌，其吸光度的增高速率与酶活力成正比。

试剂

比色法

①0.1mol/L碳酸盐缓冲液（pH10.0）：称取无水碳酸钠6.36g，碳酸氢钠3.36g，4-氨基安替比林1.5g，溶于800ml蒸馏水中，移入1000ml容量瓶内，加蒸馏水至刻度，置棕色瓶内保存。

②20mmol/L磷酸苯二钠溶液：称取磷酸苯二钠（AR）2.18g，迅速加入已煮沸的500ml蒸馏水中，冷却后加入氯仿2ml防腐，冰箱保存。此为基质液。

③铁氰化钾溶液：称取铁氰化钾2.5g，硼酸17g，分别溶于400ml蒸馏水中，混合后加水至1000ml，置棕色瓶内避光保存。出现蓝绿色应弃去。

④酚标准贮存液（1mg/ml）：称取重蒸馏酚1.0g，溶于0.1mol/L盐酸中，并加至1000ml刻度。也可购买标准液。

⑤酚标准应用液（0.05mg/ml）：取酚标准贮存液5ml，加蒸馏水至100ml。

连续监测法

①1.8mol/L AMP缓冲液（pH10.3）：称取2-氨基-2甲基-1-丙醇（AMP，MW89.14）160g，加1mol/L盐酸320ml混合，加500ml新煮沸已凉的蒸馏水，调pH至10.3±0.02（30℃），并加上述蒸馏水至1000ml，置紧塞瓶中于冰箱保存。

②10.5mmol/L氯化镁溶液：称取氯化镁（MgCl2·6H2O，MW20 3.31）0.21g，溶于水中，并稀释至100ml，室温保存。

③31.5mmol/L磷酸对硝基苯酚溶液（4-NPP）：称磷酸对硝基苯酚二钠盐（含6分子水，MW 371.15）120.8mg，溶于100ml蒸馏水中，置棕色瓶内于冰箱保存。

④底物缓冲液（0.84mol/L AMP，15mmol/L 4-NPP，0.5mmol/L MgCl2，pH10.3）将AMP、4-NPP和MgCl23种溶液按10∶10∶1混合，37℃预温待用。