关于CAS9

问题描述

精选答案

Clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)/Cas9是细菌和古细菌一种不断进化适应的免疫防御机制。CRISPR/Cas9利用一段小 RNA 来识别并进行有效的靶向DNA剪切。主要分为两个组成部分Cas9核酸酶和gRNA 两部分。原理是：Cas9结合gRNA， 通过gRNA上的靶点序列，在目标基因组上找到靶点序列，并揭开双螺旋， Cas9将剪切DNA双链，造成DNA双链断裂。Cas9使用简单，比较方便多个靶点同时操作。但是也比较容易脱靶，

现在CRISPR/Cas9 靶向基因操作的应用

1.细胞系的应用：共转染cas9质粒与gRNA 质粒到细胞中，48小时后做突变率的检测，和后续的单克隆培养或细胞株筛选工作。

小动物的基因敲除：体外转录cas9和gRNA成RNA，然后显微注射到动物的受精卵中。

大动物的基因敲除：先在原代细胞株中做好基因敲除（同细胞系方法）， 通过克隆动物技术，将基因敲除的细胞系的细胞核移植到去核的卵细胞中。

4. 植物的基因敲除：已有成功案列。

5. 微生物的基因敲除： 需要表达载体和该物种具有NHEJ修复方式。

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