PCR实验方法步骤

问题描述

精选答案

1、在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

10×PCR buffer

5 μl dNTP mix （2mM）

4 μl 引物1（10pM）

2 μl 引物2（10pM）

2 μl Taq酶 （2U/μl）

1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）

1 μl加ddH2O至 50 μl

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2、调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，最后在72℃ 保温7min。

3、结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4、PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。