微生物菌种平板筛选检测方法及原理

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精选答案

工业微生物菌种筛选方法

1. 菌种筛选方案 在实际工作中，为了提高筛选效率，往往将筛选工作分为初筛和复筛两步进行。

初筛的目的是删去明确不符合要求的大部分菌株，把生产性状类似的菌株尽量保留下来，使优良菌种不致于漏网。因此，初筛工作以量为主，测定的精确性还在其次。初筛的手段应尽可能快速、简单。

复筛的目的是确认符合生产要求的菌株，所以，复筛步骤以质为主，应精确测定每个菌株的生产指标。

2. 菌种筛选的手段 筛选的手段必需配合不同筛选阶段的要求，对于初筛，要力求快速、简便，对于复筛，应该做到精确，测得的数据要能够反映将来的生产水平。

2.1 从菌体形态变异分析 有时，有些菌体的形态变异与产量的变异存在着一定的相关性，这就能很容易地将变异菌株筛选出来。尽管相当多的突变菌株并不存在这种相关性，但是在筛选工作中应尽可能捕捉、利用这些直接的形态特征性变化。当然，这种鉴别方法只能用于初筛。有人曾统计过3,484个产维生素B2的阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)的变异菌落，发现高产菌株的菌落形态有以下特点：菌落直径呈中等大小（8-10毫米），凡过大或过小者均为低产菌株；色泽深黄色，凡浅黄或白色者皆属低产菌株。又如，在灰黄霉素产生菌荨麻青霉(Penicillium urticae)的育种中，曾发现菌落的棕红色变深者往往产量有所提高，而在赤霉素生产菌藤仓赤霉（Gibberella fujikuroi）中，却发现菌落的紫色加深者产量反而下降。

2.2 平皿快速检测法 平皿快速检测法是利用菌体在特定固体培养基平板上的生理生化反应，将肉眼观察不到的产量性状转化成可见的

"形态

"变化。具体的有纸片培养显色法、变色圈法、透明圈法、生长圈法和抑制圈法等，见图5.6.1。这些方法较粗放，一般只能定性或半定量用，常只用于初筛，但它们可以大大提高筛选的效率。它的缺点是由于培养平皿上种种条件与摇瓶培养，尤其是发酵罐深层液体培养时的条件有很大的差别，有时会造成两者的结果不一致。 图 5.6.1 平皿快速检测法示意图 平皿快速检测法操作时应将培养的菌体充分分散，形成单菌落，以避免多菌落混杂一起，引起

"形态

"大小测定的偏差。

1) 纸片培养显色法 将饱浸含某种指示剂的固体培养基的滤纸片搁于培养皿中，用牛津杯架空，下放小团浸有3%甘油的脱脂棉以保湿，将待筛选的菌悬液稀释后接种到滤纸上，保温培养形成分散的单菌落，菌落周围将会产生对应的颜色变化。从指示剂变色圈与菌落直径之比可以了解菌株的相对产量性状。指示剂可以是酸碱指示剂也可以是能与特定产物反应产生颜色的化合物。 2) 变色圈法 将指示剂直接掺入固体培养基中，进行待筛选菌悬液的单菌落培养，或喷洒在已培养成分散单菌落的固体培养基表面，在菌落周围形成变色圈。如在含淀粉的平皿中涂布一定浓度的产淀粉酶菌株的菌悬液，使其呈单菌落，然后喷上稀碘液，发生显色反应。变色圈越大，说明菌落产酶的能力越强。而从变色圈的颜色又可粗略判断水解产物的情况。 3) 透明圈法 在固体培养基中渗入溶解性差、可被特定菌利用的营养成分，造成浑浊、不透明的培养基背景。将待筛选在菌落周围就会形成透明圈，透明圈的大小反映了菌落利用此物质的能力。 在培养基中掺入可溶性淀粉、酪素或CaCO3可以分别用于检测菌株产淀粉酶、产蛋白酶或产酸能力的大小。 4) 生长圈法 利用一些有特别营养要求的微生物作为工具菌，若待分离的菌在缺乏上述营养物的条件下，能合成该营养物，或能分泌酶将该营养物的前体转化成营养物，那么，在这些菌的周围就会有工具菌生长，形成环绕菌落生长的生长圈。 该法常用来选育氨基酸、核苷酸和维生素的生产菌。工具菌往往都是对应的营养缺陷型菌株。

5) 抑制圈法 待筛选的菌株能分泌产生某些能抑制工具菌生长的物质，或能分泌某种酶并将无毒的物质水解成对工具菌有毒的物质，从而在该菌落周围形成工具菌不能生长的抑菌圈。例如：将培养后的单菌落连同周围的小块琼脂用穿孔器取出，以避免其它因素干扰，移入无培养基平皿，继续培养4-5天，使抑制物积累，此时的抑制物难以渗透到其它地方，再将其移入涂布有工具菌的平板，每个琼脂块中心间隔距离为2厘米，培养过夜后，即会出现抑菌圈。抑菌圈的大小反映了琼脂块中积累的抑制物的浓度高低。该法常用于抗生素产生菌的筛选，工具菌常是抗生素敏感菌。

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微生物菌种平板筛选检测方法是一种分离和鉴定微生物菌种的常用方法。其基本原理是通过将微生物样品分布于富含营养物质的平板培养基上，利用微生物菌种特异的营养需求和代谢特征，在不同的培养条件下筛选出具有特定性质的微生物菌株。

具体步骤如下：

1. 准备平板培养基：选择适当的培养基，如营养琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂等，加入适当的营养物质和指示剂。

2. 样品处理：将待测样品经过适当的处理方法，如稀释、过滤等，以获得合适的菌落数。

3. 涂布法：采用无菌的铂铑棒或菌液滴布法，在平板表面均匀涂布待测样品。

4. 培养：将涂布后的平板培养基在适当的温度和气氛条件下培养，观察菌落生长情况。

5. 鉴定：根据菌落形态、颜色、大小等特征，结合生理生化特性和分子生物学方法，进行微生物菌种的鉴定和分离。

微生物菌种平板筛选检测方法具有简单、快速、高效的特点，广泛应用于食品、水产品、环境和医疗等领域的微生物检测和研究中。

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微生物菌种平板筛选检测方法是一种常用的微生物检测方法，主要是通过使用富含特定微生物选择性因子的寒天培养基，将需要检测的样品涂抹在培养基上，然后进行培养和筛选，以筛选出目标微生物菌种。

方法步骤如下：

1. 准备富含特定微生物选择性因子的寒天培养基；

2. 将需要检测的样品涂抹在寒天培养基上；

3. 将寒天培养基放置在适宜的温度下进行培养；

4. 观察培养基上的菌落形态和特性，并进行鉴定或进一步确认。

该方法的原理是利用选择性寒天培养基的特殊成分，能够抑制非目标微生物的生长，从而取得较好的筛选效果。此外，培养温度、时间和环境因素等影响也需要考虑，以进一步优化筛选检测方法的效果。此外，该方法也可以通过在培养基中添加特定抗生素或营养因子等方式，进一步提高特定微生物菌种的筛选。

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一、微生物的筛选方法

 1、单菌落挑取法:利用平板划线法或稀释涂布平板法接种在固体培养基表面，根据目的微生物特定的菌落特征，利用单菌落挑取的方法挑选目的微生物。

 2、选择培养法:利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接筛选目的微生物。

 3、鉴定培养法:利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物。

 4、根据功能可分为选择培养基和鉴别培养