荧光偏振原理

问题描述

精选答案

荧光偏振工作原理：

将磷酸化底物进行荧光标记，蛋白激酶产生的磷酸化产物不进行荧光标记。让两种磷酸化产物与抗丝氨酸抗体（丝氨酸和苏氨酸是最常见的磷酸化位点,因为其结构末端含有羟基,羟基很活泼,可以与磷酸基团结合）相竞争结合。

当反应液中没有蛋白激酶产生的磷酸化产物时，荧光标记的磷酸化物与抗体相结合形成复合体，由于复合体较大，运动速率相对较小，受偏振光激发后产生的激发光具有较大的偏振值；当反应液中含有蛋白激酶产生的磷酸化产物时，因二者竞争抗体的结合位点，结合到抗体上的荧光标记物较少，游离的荧光标记物在反应液中很多，发出的激发光偏振值减小。

当蛋白激酶的活性越强，产生的磷酸化产物也就越多，与荧光标记物的竞争越激烈，对标记物产生的激发光的性质影响越大，因此偏振的改变直接与蛋白激酶的活性相关。利用这一原理可以检测蛋白激酶活性。