荧光相位检测原理

问题描述

精选答案

是荧光样品，就应该都可使用以上仪器检测（只用TIRF受一些限制）。但是实际应用时，大家可能会碰到某些样品可以使用流式和显微镜，但是无法使用共聚焦。为什么？解释一下：

首先，荧光检测必须有激发光照明，染料被特定波长的光照射以后才能发射荧光。激发光源有两种：1）白光（汞灯、氙灯等），然后通过滤光片选择只通过特定波长的光。如检测GFP时，大家能看到蓝光照射在样品上，因为GFP的激发条件是488nm 光。但是有一点，显微镜不可能装无限多的滤光片，所以选择是有限的。

2）激光，普通的激光器只能发射特定波长的光，且数量有限，常见的是405、488、514、543、633等，所以可使用的染料也是有限。因此，大家判定仪器能否满足你实验要求，务必先看看激发条件是否合适。

其次，在光检测器（PMT、CCD)前还有一块滤光片，作用是反射样品各种散射光，只通过特定波长的荧光，提高信噪比，得到干净的背景。因此，这块滤光片也决定了仪器能否满足你的实验要求（不用太担心，这个一般和激发滤光片配套，不会有太多问题）。而在光谱型共聚焦里，使用的是棱镜或衍射光栅分光，可以选择通过任意需要的波段。这对使用量子点做标记的同学特别有好处！