柱层析干法上样步骤

问题描述

精选答案

装柱方法分为湿法和干法，一般来说，湿法装柱的效果优于干法装柱。

湿法装柱： 先将柱层析的填料活化处理后浸润在适宜的有机溶剂中，使之处于有机环境。

装柱时在层析柱自下而上依次填入硅烷花玻璃棉→石英砂→已处理好的层析填料，一边装柱一边用洗耳球轻轻敲打，使填料紧实，然后打开旋塞放掉多余的有机溶剂即可进行样品分析。

干法装柱： 现在层析柱内填入硅烷花玻璃棉，然后用不同极性的有机溶剂对层析柱的内壁进行充分润洗，待层析柱晾干，依次填入石英砂及各种层析填料，同样，一边装柱一边用洗耳球轻轻敲打，使填料紧实，然后加入一定量的有机溶剂淋洗填好的柱子，一般这个体积为柱子死体积的2倍。然后打开旋塞使淋洗液流出，即可进行样品分析。

填料紧实是保证层析柱柱效的关键，一定要注意。 层析柱最下层的棉花，我们一般是用硅烷花玻璃棉的，在马弗炉中活化即可用。

如果用脱脂棉，需要用二氯甲烷抽提3遍以去除杂质，以防干扰实验。

其他回答

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上样也有干法和湿法之分：干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后，在加入少量硅胶，拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。干法上样较麻烦，但可以保证样品层很平整。湿法上样就是用少量溶剂（最好就是展开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解后，再用胶头滴管转移得到的溶液，沿着层析柱内壁均匀加入。然后用少量溶剂洗涤后，再加入。湿法较方便，熟手一般采用此法。

上样完毕后，接着即用淋洗剂淋洗。淋洗剂一般采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。由于层析柱和薄板的不同，即使两者使用的硅胶都相同，但是在把TLC分析得到的展开剂用在柱层析时，也显得极性偏大，所以要稀释一倍，但又不能稀释太多，否则成了靠扩散作用来分离，效果也不会好