pcr胶的配制

问题描述

精选答案

PCR如何选择胶浓度？

根据PCR条带大小来确定，一般1kb以内用2.0~2.5%的TBE胶（0.5X TBE 缓冲液来配置）；1kb以上用1.0~1.2%的TAE胶（1X TAE 缓冲液来配置）；

5X TBE缓冲液母液的配制

1. 分别用电子天平称取下列物品放入烧杯中。

2. 加800mL ddH2O使试剂溶解，倒入2L瓶中，定容至2L。

3. 使用时稀释十倍成0.5X TBE。

50X TAE缓冲液母液的配制

1. 称量Tris 484g，Na2EDTA·2H2O74.4g于2L烧杯中。

2. 向烧杯中加入ddH2O约1500mL，充分搅拌溶解。

3. 加入114.2mL的冰乙酸，充分搅拌。

4. 用ddH2O定容至2L后，室温保存，待用。

5. 使用时稀释50倍，即1X TAE。

电泳时的电压、时间？

根据电泳槽的规格来确定， 看电泳槽多大，两电极直接的距离，每cm 4~7V。例如一个20cm的电泳槽，电压就应该设为80~140V间；电泳时间是根据电压来确定，一般是20~30min。

每个点样孔要多少μl样品？

一般按照报告中的35个循环扩出的样品，只需要点5μl即可。