t4载体正确连接方法

问题描述

精选答案

首先是T,A连接,就是现在通常使用的T载体,一般的PCR产物都在两端加个A,这样T,A相配,T4连接酶可以把他们连在一起.第二,粘性酶切位点连接,把载体和外源基因用相同的酶进行酶切（双酶切,或者单酶切都可以）回收相应的片段,用酶切出来的粘性末端进行配对,T4连接酶进行连接.第三,平末端连接,也是用酶切,平末端也可以用T4连接酶连接,不过连接效率低的很.第四,同源重组,用一个含有目的基因的载体A和另外一个载体B共转染（转化）宿主,可以通过同源重组产生包含目的基因的B载体.多用在病毒载体和重组病毒的构建上.