dapi需要移出多聚甲醛嘛

问题描述

精选答案

dapi需要移出多聚甲醛

1)在染色前的细胞密度约是0.8X105/孔（293T细胞/六孔板每孔）。

2)移去完全培养基，用PBS清洗一次。

3)用10％的甲醛溶液或者4%的多聚甲醛PBS在室温固定20分钟。

4）用PBS在室温漂洗三次，每次10分钟。

5）用含0.5%Triton-X-100的PBS在室温通透化处理15分钟。

6）用PBS在室温漂洗三次，每次10分钟。

7）在室温用含10%NGS的PBS封闭1小时，或者在4摄氏度封闭过夜。

8）在37摄氏度用特异性一抗孵育半小时，或者在室温下孵育一小时以上或者4摄氏度孵育过夜。

9）用含0.1% Tween-20的PBS在室温漂洗三次，每次10分钟。

10）用铝箔包裹后在37摄氏度用二抗孵育半小时以上，或者在室温下孵育一小时以上。

11）去除二抗，加入DAPI染色液室温作用15分钟以上。

12）用含0.1% Tween-20的PBS在室温漂洗三次，每次10分钟。

13）在荧光显微镜下观察，用合适波段激发，照相保存实验结果。