您好，能否提供SOD，CAT,POD,MDA的测定方法和具体操作时的注意事项啊

问题描述

精选答案

采用NBT法测定SOD酶活性。在黑暗条件下，向小烧杯中分别加入：62.5mmol/l pH7.8磷酸缓冲液4ml、30mmol/ldl-甲硫氨酸0.2ml、3µmol/LEDTA0.1ml、1.125mmol/l NBT0.2ml、60µmol/l核黄素0.2mL，上述提取出的各处理的酶液0.05mL，以不加NBT和酶液但用缓冲液代替的混合液作为校零对照，测最大值时只不加入酶液但用缓冲液补齐，加完所有的物质后，在人工培养箱中用日光灯光照25分钟后，用分光光度计在波长560nm的情况下测定各管的OD值。以能抑制反应50％的酶量为一个SOD单位，其活力可由下面的公式计算：

SOD活力(U/mg蛋白)= (对照管吸光度-测定管吸光度)/对照管吸光度/

[(50％)×加入粗酶液中的蛋白质含量(mg)]

3过氧化物酶（POD）的测定：

0.05mol/L磷酸缓冲溶液(PBS)（pH=7.0）溶液的配制：10.9251g Na2HPO4•12H2O + 3.042975g NaH2PO4•2H2O,定容到1000ml。

0.3%H2O2溶液的配制：吸2.5ml 30%H2O2，用0.05mol/L pH=7.0磷酸缓冲溶液(PBS)定容到250ml。

0.2%愈创木酚溶液的配制：称0.5g愈创木酚，用0.05mol/L pH=7.0磷酸缓冲溶液(PBS)定容到250ml。

2ml 0.3%H2O2溶液 + 0.95ml 0.2%愈创木酚溶液 + 1ml 0.05mol/L pH=7.0磷酸缓冲溶液(PBS) + 0.02ml？？（原来为0.01）酶液（根加0.05ml酶液）（对照用0.05mol/L磷酸缓冲溶液代替酶液）（做三个重复），记录470nm处OD降低速度。将每分钟OD增加0.01定义为1个活力单位。（参考陈建勋，王晓峰主编的《植物生理学实验指导》P121）

比色时加酶液，混合后即刻计时。

04级 采用愈创木酚法测定POD酶活性。取光径1cm的比色杯2只，一只中加入反应混合液3mL，62.5mmol/l磷酸缓冲液1ml作为较零对照，另一只中加入反应混合液3mL，62.5mmol/l磷酸缓冲液0.9ml，上述提取得酶液0.1ml，立即开启秒表计时，于分光光度计470nm波长下测定OD值，每隔一分钟读数一次，以每分钟OD变化值表示酶活性大小，即以△OD470/min•mg蛋白质(或鲜重g)表示。