cck8详细实验步骤

问题描述

精选答案

方法/步骤分步阅读

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先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞到培养板内。

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按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每个浓度建议3-6个复孔。

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接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。）

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在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。将培养板放在培养箱中预培养一段时间（37℃,5% CO2），向每孔加入10 μL CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数），将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

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用酶标仪测定在450nm处的吸光度。若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。

24小时内测定，吸光度不会发生变化。

总结：

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1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。

2、按比例 ( 例如:1/2比例 ) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度。

3、建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。

注意事项

如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基。

当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。