色谱和层析的区别
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色谱柱法属于柱色谱,高中生物实验中使用的是纸上层析法,也就是纸色谱法,柱色谱和纸色谱二者的基本原理是类似的。但是二氧化硅和碳酸钙的作用却不相同,高中生物实验使用的纸上层析法,二氧化硅和碳酸钙仅在研磨绿色叶片时使用,随后在研磨液的过滤中,二者已经被过滤掉了,与色谱柱法使用碳酸钙和二氧化硅(实际上是硅胶)填充柱子作为吸附剂是两回事情。
高中生物实验中,研磨绿色叶片时加入的少量二氧化硅,实际上用洗干净的细河沙或者细石英砂代替都是可以的,起到一个使得研磨均匀的目的。但充分研磨时植物细胞破裂,含有有机酸的细胞液流出,有可能破坏叶绿素,因为从本质上讲,叶绿素是有机碱与镁离子的络合物,有机酸有破坏这种络合物的可能,因此加入少量碳酸钙,可以与有机酸反应除去有机酸,就可以保护叶绿素不被破坏。
叶绿素纸上层析实验甚至可以在家里做(虽然效果差一些,时间长一些),将10g左右菠菜叶片尽量切碎,加入少量洗干净的细河沙和小苏打(碳酸氢钠),再加入10ml 95%医用酒精(乙醇),充分研磨成匀浆状,用塞有少量脱脂棉的小漏斗过滤得到溶液后,直接倒入干燥大容器底部(较细的玻璃罐头瓶即可),将大的普通定性滤纸剪成宽1.5cm—2cm的滤纸条,下端剪去两个角(如同高中生物实验中的做法),插入大容器中(最好在滤纸条上端打孔,用线吊入),滤纸条下端浸入叶绿素溶液,容器加盖,在没有光直射的位置静置,很快即可看到绿色逐渐沿滤纸条上移,过一小会可看到绿色上方出现黄色(胡萝卜素和叶黄素),待黄色上升到滤纸条一半左右时,取出滤纸条,换一个盛有少量95%酒精的干燥大容器,将滤纸条下端重新浸入95%酒精,容器加盖静置,一段较长时间后即可得到几条色素色带,做成功的关键是滤纸条要尽量长一些。
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层析需要显影剂,如果不需要显影剂的话好像也是在跑完层析的时候要到特定的检测器中检测透过光吧,有的时候是定量的,有的时候是定性的,色谱好像只能等待所有的组分都出柱子才能检测到,而层析只要到分离开就可以,但是层析我不知道密闭性有多好,我看到的层析只有至层析,那是定性的,还有硅胶层析吧,这个我都在现实中看到过,还有一种圆盘的层析,总感觉和色谱差不多。
做过一个凝胶电泳,给我的感觉也是层析,里边会有氨基酸形成的段格。给我看好多东西都是差不多的。
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