如何用乙醇沉淀法浓缩质粒DNA

问题描述

精选答案

用乙醇沉淀法浓缩质粒DNA：

提取液中加入等体积预冷的5mol/L Licl 充分混匀，1000rpm 4℃离心15min，取上清。

加等体积异丙醇，混匀，室温放置10min，10000rpm 4℃离心15min。

弃上清，纯点加入70%乙醇洗涤一次，沉淀风干10~15min。

500ul，含RNA酶的TE（pH8.0）溶解沉淀，室温放置30min。（将质粒RNaesA混合物用酚：氯仿抽提一次，然后用氯仿抽提一次）

用2.5倍体积无水乙醇沉淀质粒，风干10min。

加1ml灭菌水溶解沉淀，加500ul PEG-MgCl2溶液，充分混合，室温10min，12000rpm 4℃离心15min。

用70%乙醇重悬沉淀，12000rpm 4℃离心15min。

弃上清，沉淀用70%乙醇处理一次，最后将质粒，溶于500ulTE（pH8.0）中，取1ul质粒DNA，100倍稀释后测OD260，计算DNA的浓度，其余封装，-20℃保存备用。