迁移实验的四个步骤

问题描述

精选答案

迁移实验步骤

迁移实验

目的：检测细胞的迁移能力或药物对细胞迁移能力的影响。

材料：HepG2细胞、BD公司 insert、BD公司 24孔板

步骤：

1. 将饥饿24小时的细胞从孵箱取出，酶解好，弃酶，加入无血清培养基，吹打混匀，离心800 x 3min.

2. 弃上清，细胞沉淀加入无血清培养基吹打混匀，计数，稀释浓度为2 x 105个/ml.

3. 取出insert放入24孔板中。先加下室培养基（含血清1%）700微升，insert中加入200微升细胞悬液。

4. 将insert放置到24孔板的相应位置，防止insert底部有气泡，否则将影响实验结果。

5. 37℃孵箱 4--6小时。

6. 取出24孔板，弃去上下室培养基。下室加入700微升从-20保存的甲醛，4度放置1小时。

7. 弃去甲醛，PBS洗一遍，下室加入苏木精700微升。染色20-30min.

8. 回收苏木精。Insert 用PBS洗3遍，每次都用棉棒擦拭insert里边，将没有迁移的细胞擦去。

9. 下室加入PBS700uL，将Insert放好，明视场照相（200倍）。每组每个Insert随意拍照6个视野，细胞计数取平均值。

10. 细胞计数用imageJ软件。Open--分析--cell count。