如何在菌落或噬菌体中提取DNA片段

问题描述

精选答案

一、水煮模板法——主要用于PCR反应：操作最简便，对试剂条件要求低。缺点是纯度不够高可能会含有RNA、蛋白等杂质s但是作为-般检测目的的PCR反应模板已经足够了。:

有人称扩增4kb以下片段都可用此种方法制取模版，编者用此类模板PCR可以扩增到3500bp的片段。编者建议:此法得到的模版保存时间短，强烈建议每月重新制作-次。

二、CTAB/NaCl 法 ：CTAB/NaCl法提取的DNA纯度较高，蛋白杂质较少,保存时间长,编者更喜欢把终浓度为20∪g/ml RnaseA加在第5步温育的时候，这样最后没有RnaseA污染每一步操作细致一 些得到的DNA可用于Southern bloto编者建议:长时间保存DNA可放于20C，但要尽里减少反复冻融，颓憬响DNA质量。

三、盐析法：介于方法和方法二之间,CTAB虽然取出糖分效果较好,但CTAB本身也是有毒的所以此方法放弃了CTAB。

革兰氏阳性菌，由于细胞的结构与阴性菌有差别，裂解比阴性菌稍微麻烦一些，可以采取CTAB/NaCl法稍加修改，在第四步加入终浓度2mg/ml 的溶菌酶，37 度温育1h。

实验注意:提基因组最好要将枪头尖剪掉(剪掉以后在酒精灯上迅速过一下，使其断口圆滑)。以免枪头损伤基因组:抽干时最好是风干。