transwell迁移试验步骤

问题描述

精选答案

1.取培养好的不同分组细胞，倒掉培养基，加入3ml PBS清洗，0.25%胰酶分别消化收集，1000rpm，5min离心去上清，PBS润洗两次，清洗掉残余血清；

2.无血清MEM培养基重悬细胞，细胞计数板计数，无血清MEM培养基稀释细胞浓度至2×104cell/ml，备用。

3.在24孔板中预先加入300ul 10% FBS MEM培养基（含双抗），并放入transwell小室，1h后在transwell上室分别接入200ul各组细胞悬液，37℃，5% CO2培养箱培养18h；

4.取出transwell，用PBS小心清洗小室一遍，用干净的棉球将上室一侧的未迁移的细胞擦干净，用10％甲醇溶液固定细胞30秒钟。

5.小心切下膜，在膜上滴一滴结晶紫染液，室温中放置20分钟，PBS清洗一下，显微镜下观察拍照。