dna染色过程

问题描述

精选答案

DNA染色步骤如下：

1.提前一天细胞铺板

提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞密度在60％左右为宜。

2.转染过程

⑴将0.8μg的DNA用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成DNA稀释液。

⑵将2μl的EntransterTM-H4000用25μl无血清稀释液体稀释，充分混匀，制成EntransterTM-H4000稀释液。室温静置5分钟。

⑶将EntransterTM-H4000稀释液分别加入到DNA稀释液中，充分混匀（可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上），室温静置15分钟。转染复合物制备完成。

⑷将转染复合物加入到含细胞和完全培养基的培养容器上，轻柔混匀。 注意：

①对本试剂，采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。

②完全培养基可加抗生素。

⑸培养4-6小时后更换培养基，继续培养24-48小时。 注意：

①如细胞没有毒性等不良情况，转染后4-6小时可不必更换培养基。

其他回答

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1

吹打使其为细胞悬液，并且用PBS进行清洗.

2

离心细胞，1000r/min,10min,吸走上清夜。

3

固定细胞：加入固定buffer，15-30min，4℃。

4

涡旋（使细胞分开），加入5mL的70-80%的乙醇到细胞中。-20℃孵育2h。

5

清洗两次以去除乙醇。先用1X的PBS清洗，再用染液进行第二次清洗。

6

离心细胞，10min，1000-1500r/min,吸走上清液。

7

染色：调整细胞为10^6细胞数/test:加入0.5mL的PI/RNAse 染液。

8

室温孵育15min。

9

样品上机分析。