电泳胶板怎么做

问题描述

精选答案

根据分离要求确定是琼脂糖还是聚丙烯酰胺，根据分离分子的分子量确定浓度；加水加热融化，装好梳齿，合适温度加入显色剂（或者跑完电泳染色），倒胶板。以下为琼脂糖凝胶电泳的操作：

1 选择合适的水平式电泳槽，调节电泳槽平面至水平。检查稳压电源与正负极的线路；

2 选择孔径大小合适的点样梳子，垂直架在电泳胶模的一端，使点样梳子底部离电泳胶模底部的距离为1.0mm；

3 按待分离DNA，配制相应浓度琼脂糖，100℃水浴加热至琼脂糖融化均匀；

4 用吸管取少量琼脂糖凝胶溶液将电泳胶模四周密封好，防止浇灌琼脂糖凝胶板时发生渗透。待琼脂糖凝胶冷却至50℃左右时，加入6μl核酸染料，摇匀，轻轻倒入电泳胶模中，琼脂糖凝胶的厚度在3～5mm。倒胶时要避免产生气泡，若有气泡可用吸管小心吸去；

5 琼脂糖凝胶凝固后，在室温放置20min，小心拔掉点样梳子和电泳胶模两端的挡板，保持点样孔的完好；

6 将电泳胶模放入电泳槽中，加入电泳缓冲液，使电泳缓冲液面高出琼脂糖凝胶表面1～2mm。如点样孔内有气泡，用吸管小心吸出，以免影响加样；

7 将10μl DNA样品与2μl体积的溴酚蓝指示剂点样缓冲液混合。上样缓冲液不仅可以提高样品的密度，使样品均匀沉到样品孔内，还可以使样品带颜色，便于上样和估计电泳时间和判断电泳的位置；

8 用微量移液器将样品小心加入加样孔内，记录样品点样秩序；

9 盖上电泳槽，开启电源开关，最高电压不超过5V/cm（100～150V恒压电泳），使DNA从负极向正极移动；

10 电泳时间随实验的具体要求而异。电泳一般需1～3小时。电泳完毕后关闭电源，戴一次性塑料手套取出凝胶，尽可能将所有的电泳缓冲液淋干，在254nm波长的透射紫外灯下观察。