pcr扩展条带不齐怎么回事

问题描述

精选答案

因为PCR的反应条件与很多参数有关系。如模板浓度，引物长度及GC含量，引物浓度，dNTPs浓度，选用的taq enzyme,缓冲液的离子含量，产物大小，变性时间，退火温度及时间，延长的时间。

物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性;退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。

有时还有必要用标准的温度计，检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度，这也是PCR失败的原因之一。