western上下层ph为什么不同

问题描述

精选答案

上层的浓缩胶用的是Tris-HCL缓冲液，PH6.8，HCL的解离度大，几乎全部成CL-，CL-在电场中移动最快。而电泳槽中含有甘氨酸，在PH6.8时只有少量解离，在电场中移动的最慢。蛋白质（被夹在中间）就在由快慢离子形成的电位梯度中被浓缩了。

下层的分离胶用的是Tris-甘氨酸缓冲液，PH8.8，在此PH下，甘氨酸解离度增大，泳动速度增加并超过了蛋白质，原先的电位梯度消失，大小形状不同的蛋白质在电场中分离。