细菌的常用染色技术

问题描述

精选答案

简单染色法：利用单一染料对细菌进行染色的一种方法.例如番红.

1．涂片：用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀,涂成极薄的菌膜.

2．干燥：可自然晾干,或将涂片置于火焰高处微热烘干,但不能直接在火焰上烘烤.

3．固定：手执玻片一端,有菌膜的一面朝上,通过迅速通过火焰2-3次（用手指触涂片反面,以不烫手为宜）.

4．染色：加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液),染l～2min.

5．水洗：用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止.

6．干燥

7．镜检 复染色：利用用两种以上染料对细菌进行染色.例如革兰氏染色法. 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,需要碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）. 碱性染料初染液的象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样,而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）.媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力,即以某种方式帮助染料固定在细胞上,使不易脱落,碘（iodine ）是常用的媒染剂.脱色剂是将被染色的细胞进行脱色,不同类型的细胞脱色反应不同,有的能被脱色,有的则不能,脱色剂常用95%的酒精（ethanol）.复染液也是一种碱性染料,其颜色不同于初染液,复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色,而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色,而且将细胞区分成G+和G-两大类群,常用的复染液为番红. 1.载玻片固定.在无菌操作条件下,用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀,在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定. 2.草酸铵结晶紫染1分钟. 3.自来水冲洗,去掉浮色. 4.用碘-碘化钾溶液媒染1分钟,倾去多余溶液. 5.用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒,革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色,革兰氏阴性菌被褪色而呈无色. 6.用番红染液或者沙黄复染30秒,革兰氏阳性菌仍呈紫色,革兰氏阴性菌则呈现红色.