蛋白纯化过镍柱以后为什么会沉淀

问题描述

精选答案

蛋白浓度过高的时候，会发生聚集而沉淀。有些不易溶蛋白随着镍柱的富集作用就会沉淀。由于不知道你实验目的，简单认为你要纯化表达的蛋白，解决方法：

1. 换更强亲水肽段载体pet50（从酶切链接开始做），但是这样会在表达出来蛋白中增加非目的蛋白成分2. 不要用最佳浓度咪唑洗脱，用稍差一些的，这样洗脱出来蛋白速度慢，浓度低，但是看你是否对浓度要求了。

3. 重新设计引物把输水片段删掉，这样增加可溶性再表达纯化4. 考虑在沉淀里加入稀盐，促溶。但不知对你实验是否有影响