pcr电泳条带淡的原因

问题描述

精选答案

1.最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系。

2.与反应起始时RNA的总量及纯度有关。

3.建议在试验中加入对照RNA。

4.第一链的反应产物在进行PCR扩增时，在总的反应体系中的含量不要超过1/10。

5.建议用Oligo(dT)或随机引物代替基因特异性引物（GSP）用于第一链合成。由于RNA模板存在二级结构，如环状结果，有可能导致GSP无法与模板退火；或SSⅡ反转录酶无法从此引物进行有效延伸。

6.目的mRNA中含有强的转录中止位点，可以试用以下方法解决：（1）将第一链的反应温度提高至50℃。

（2）使用随机六聚体代替Oligo(dT)进行第一链反应。