jh6载体更换过程

问题描述

精选答案

1. 准备工作：购买新的jh6载体，取出旧的jh6载体。

2. 将细菌培养物离心收集细胞，将上清液倒掉，用PBS洗涤一次。

3. 加入适量的含CaCl2的冷复性水（如10%甘油），使得菌体悬浮于其中。

4. 取出新的jh6载体，并加入所需酶切片段和T4 DNA连接酶。混匀后放置在冰上静置15分钟。

5. 将步骤3中制备好的菌体悬浮液与步骤4中制备好的DNA溶液混合均匀。然后将混合物转化到大肠杆菌DH5α或其他适当宿主中。

6. 在LB平板上进行筛选。可以使用抗生素、X-gal等方法来筛选正常重组子代克隆并进行PCR验证确认是否成功更换了jh6载体。