怎样配制percoll细胞分离液

问题描述

精选答案

最简单快速的方法是用高浓度离散剂Guanidium thiocyanate裂解后 （离散剂可以打断所有蛋白质与DNA的非共价结合从而分离组蛋白和其他DNA结合蛋白），乙醇沉淀纯化核酸。整个过程不超过20分钟。裂解液配方如下：6M guanidium thiocyanate, 1M Tris-HCl (pH 7.5), 1mM EDTA, 4% Triton X100, 1% Sarkosyl (可省略).操作步骤如下 （适用于6 well plate以及100mm dish）移除贴壁细胞培养液后无需用PBS清洗，可直接加入1ml裂解液。

因为裂解过程非常快，无需等待可直接加入1/2体积的100%乙醇，该过程不需要常规的二倍量乙醇和十分之一体积的醋酸钠中和。

将lyaste转移至1.5mls试管后在-20度静置五分钟，然后移至离心机最高速离心10-15分钟。

核酸在离心后沉淀，沉淀物用乙醇再洗一次，然后溶于200微升8mM稀氢氧化钠，完全溶解后加入23.4微升0.1M HEPES中和。