如何提高PCR的扩增效率

问题描述

精选答案

P不出来，如果引物没有问题那就是反应条件没有设置好了

首先看看你所用的酶的效率（普通Taq酶的效率为0.8~1.2kb/s），延伸时间是不是太短了，再看看酶活性是不是还好，做个阳性对照

其次看看退火温度，是不是过高或者过低

再次看看你的模板，如果是基因组DNA，跑跑胶看看有没有降解，量加的够不够（基因组属于复杂模板，起始量应稍大一点），如果是RT产物，量又不能加太多，RT体系里的成分会抑制PCR反应

最后看看你的时间，一般初始变性2~5min，变性20s~30s，退火20s~30s，延伸视长度而定，终延伸7~10min

以上差不多是做PCR基本的东西，仅供参考