pbs洗涤细胞如何操作

问题描述

精选答案

操作步骤去下，

步骤一：取材

撕取洋葱鳞茎内表皮2～3mm2置于载玻片上，用吸管加6mmoI的PBS缓冲液两滴，使材料充分浸入到液体中，处理约5分钟。（撕取的材料大小适中，且为内表皮）

步骤二：去垢处理

用吸水纸吸净浸泡材料的PBS缓冲液，加2～3滴37°C预温的去垢剂1%TritonX-100，使液体充分浸泡材料，并立即放入37C水浴锅中处理15分钟。（吸水纸不要直接在材料上面吸，以免带丢材料，去垢处理过程中不要让材料干燥）

步骤三：冲洗

吸去 1%Triton，用6mmol的PBS缓冲液轻轻冲洗，反复两至三次。

步骤四：固定

用吸水纸吸尽PBS缓冲液，加2滴3%戊二醛固定约20分钟。

步骤五：冲洗

吸去3%戊二醛固定液，用6mmol的PBS缓冲液轻轻冲洗，反复两至三次。

步骤六：染色

吸去PBS缓冲液，滴几滴0.2%考马斯亮蓝R250染料，染色约10分钟。

步骤七：制片

加盖盖玻片，用吸水纸吸去多余染料。（加盖玻片时倾斜放置，避免气泡产生；吸去多余染料时仅吸去盖玻片四周溢出的染料，不要太干，以免产生气泡）

步骤八：观察

观察将制好的玻片置于低倍镜下，可见到规则排列的多边形洋葱表皮细胞轮廓，在细胞质中可见到被染成蓝色的粗细不等的分枝状或点状结构，这就是细胞骨架。然后转高倍镜继续观察，调节细准焦螺旋可见到细胞骨架的立体结构。