wb内参怎么用

问题更新日期：2024-10-19 00:04:23

问题描述

精选答案

WB实验中应该如何使用内参？

✦ 简易标记法

只要在二抗孵育时加入 HRP 标记内参抗体，按照正常操作即可。

✦ Stripping 和 Reprobing

确定内参表达的常用方法是 Stripping 和 Reprobing。行目的蛋白的抗体孵育显色和检测。然后使用 Strip 缓冲液洗掉膜上的抗体，再用内参特异性抗体重新检测。

在 Strip 之后，为了确认完全的抗体去除，膜应洗涤、封闭，然后用二抗染色。如果 Strip 完成，二抗将不产生检测信号。如果检测到信号，则必须优化 Strip 条件。

其他回答

网络怪才

1. 选择内参抗体需要考虑分子大小和表达量。

2. 确定内参表达的常用方法是Stripping和Reprobing。

3. 剪膜实验需要在转膜后预染，根据蛋白质Marker的大小将膜剪为大分子量和小分子量两部分。

4. 内参抗体与目的蛋白分子量大小相当时，WB结果无法直接观察，需要进行准确数据的分析。

其他回答

网络怪才

根据不同位置比如胞浆、线粒体、细胞核选择；与你的目的蛋白分子量要有差距，不然跑在一起无法分开～