rnaa260与a280的比值分析

问题描述

精选答案

RNA的浓度和A260/A280的比值呈正相关。 A260nm 是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围，稀释或浓缩样品，使之在此范围内；如果吸光度小于0.05，检查是否存在操作因素（如移液不准确，样品内有悬浮物等）影响。DNA样品的A260 吸光度值是否>0.1。（请注意，这个值跟仪器无关，核酸的吸光度必需大于0.1，其值才有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收，其值<0.1）。 A 吸光值 I0 入射光强度 I 投射光强度 c 吸光物质的摩尔浓度（mol/L） d 光通过的液层厚度（cm） ε 摩尔吸光系数（Lmol-1cm-1） A280nm 是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯RNA为2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。比值=1.5相当于50％蛋白质/DNA溶液 A260/A280 是核酸纯度的指示值，纯度好的DNA，在pH7-8.5 下其比值应该在2.0 或2.5，A260 / A280的比值， 用于评估样品的纯度， 因为蛋白的吸收峰是280 nm。 纯净的样品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。

其他回答

默默无闻的公务员

这和核酸的结构有关系,纯净而完整的RNA在A260和A280以及A230的吸收峰的比值是一定的,也就是说这个接近一个固定值,并不受到外界条件的影响.只有当有杂质存在的时候,才会导致这比值发生变化.如蛋白质会在A280有强烈的吸收值,这样会导致A280的值上升,这样A260/A280就会下降了.同样多糖会使A230的值升高,所以比值也会下降.一般对于DNA,纯净的时候比值是1.8,而对于RNA则是接近2.0.如果超过这个值,那么最有可能的就是核酸降解了,因为寡聚的核酸和核苷酸在260的吸收峰比长链核苷酸要大,所以会使比值上升.