RCA循环管理方法

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精选答案

滚动式循环放大(RCA)法是一种能够在恒温条件下，使标记有寡核苷酸探针(与组织细胞内的核苷酸无相关性)的抗体(特异性一抗或第二抗)与组织细胞内的抗原结合后，在DNA聚合酶的作用下，加入的寡核苷酸进行循环扩增，产生一条扩增的DNA序列拷贝产物，此时，标记在抗体上的寡核苷酸得到有效扩增(109倍)，扩增后的产物与后续加入的标记有示踪物的寡核苷酸进行互补杂交，在抗原-抗体周围形成众多带有标记示踪物的杂交体，最后通过IHC方法再放大示踪物。该方法具有很高的敏感性和特异性。首先要合成三条寡核苷酸探针(引物)，然后将寡核苷酸与抗体结合，最后进行RCA免疫组化染色。