E花环实验的原理

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精选答案

淋巴细胞包括T细胞、B细胞和NK细胞。从淋巴细胞中选择性分离出均质的特殊淋巴细胞群及亚群，对深入研究免疫细胞的分化过程、生物学特性与功能等具有重要意义。目前采用的分离方法有E花环形成分离法、尼龙毛柱分离法、免疫磁珠分离法、流式细胞仪分离法等。本试验以E花环形成试验为例。

实验原理：人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞(SRBC)受体，能够与SRBC结合形成花环样细胞团(即E花环)。此试验用于计数T细胞数量，可判断机体细胞免疫状况。由于T细胞的异质性，其对SRBC的亲和力亦不同，因而T细胞可形成不同类型的E花环，其中在4℃放置1 h以上，所形成的花环数代表T细胞总数，称为总花环(Et花环)，而淋巴细胞与SRBC混合后不经4℃作用立即反应形成的花环称为活性花环(Ea花环)。

主要试剂和器材：

1. 肝素抗凝剂 用Hank,s液将肝素配成500U/ml，分装，每管0.1ml，置4℃备用。

2.淋巴细胞分离液(密度为1.077±0.001)。

3.小牛血清 56℃加热灭活30 min，按2∶1比例与沉积SRBC混合，置37℃30 min后，2000r/min离心20min，收集上清液备用。

4.0.5%SRBC悬液 无菌取绵羊血，脱纤维，或Alsever液保存的绵羊血，用5～10倍量生理盐水洗3次。第3次2500r/min离心10min，弃上清液，用生理盐水配成0.5%SRBC悬液(约108个细胞／ml)。

5.0.8%戊二醛 取4.5g/L NaCl盐水30.25 m1，加入25%戊二醛lml。

6.姬姆萨-瑞氏染液 取磷酸缓冲液10ml，加入姬姆萨染液6滴及瑞氏染液1滴。

7.Alsever液 、Hank,s液(无Ca2+和Mg2+，pH7.2～7.4)、1/15mol／L PB(pH 7.0～7.4)、生理盐水。

8.离心机、水浴箱、电冰箱、显徽镜、离心管、载玻片、盖玻片、吸管、吸球、注射器。