菌落PCR的时候退货温度该怎样设置

问题描述

精选答案

菌落PCR的退火温度最好设置成梯度降温形式：比如，从65度开始退火，每扩增一个循环降0.5度，总共扩增30个循环。

因为菌落裂解后，含有细菌的总DNA，容易出现非特异性扩增，梯度降温能够显著提高特异性扩增，减少非特异性扩增。至于退火温度的起始以及梯度设置等要视具体情况而定。

此外应注意，退火之前的变性时间应稍微延长，以保证菌体充分裂解。