为什么采用蔗糖密度梯度离心

问题描述

精选答案

使用蔗糖密度梯度离心时，不同浓度的蔗糖为什么会分层纯化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度离心法，能得到比较纯的病毒。其过程如下：

1、将收集的组织或脏器或其他,用玻璃匀浆器充分研磨后制成悬液,经反复冻融3 次后,置- 20 ℃冰箱中,备用。

2、先以5000g离心15分钟后，获取上清夜，然后再20000g高速离心30分钟后取上清夜。

3、接着10万g超速离心2h，将沉淀用少量STE溶解。

4、先在超速离心管中加入5-8mL的第3步所获取的含病毒样品的溶解液，然后在离心管中依次加入30 % , 45 % , 60 %的蔗糖,加的时候是用长针头从底部往上加的。

11万g离心2.5h,发现在30 %与45 % 以及45 % 与60 %之间都有一条明亮的带，用长针头将两条不同部位的带都吸取出来，分别收集到不同的瓶内。

5、去蔗糖；用STE缓冲液适量稀释纯化的病毒，然后11万g离心3h,用少量STE（根据沉淀的量决定加入多少）缓冲液把沉淀悬起，即最后获得了纯化的病毒。-20度冻纯备用，用时可用分光光度计测定其病毒含量