霉菌孢子DNA怎么提取

问题描述

精选答案

(1) 收集霉菌孢子并稀释涂布于贴有玻璃纸的PDA培养基中，培养20 h后收集新鲜菌丝体

(2) 取0.5 g 菌丝体置于冰预冷的研钵中，加入0.1 g石英砂和2 mL冰预冷的CTAB抽提液，加入蛋白酶K至终浓度0.1 mg/mL，置冰上研磨成均匀浑浊液；

(3) 液体转入5 mL离心管并加入1/10体积的10% SDS，65℃温浴20～30 min后冷却至室温；

(4) 加入等体积Tris饱和酚-氯仿（1:1）抽提2次，上层水相转入新的离心管；

(5) 加入等体积氯仿抽提1次，上层水相转入新的离心管；

(6) 加入无DNase活性的RNase A至终浓度10 g/mL，37℃温浴30～60 min；

(7) 重复步骤5一次；

(8) 上层水相加入2倍体积无水乙醇，轻轻混匀；

(9) 用使用无菌移液器吸嘴轻轻挑出染色体DNA，在70%乙醇中洗涤一次，室温凉干残留乙醇；

(10) 加适量体积的TE溶液溶解，保存于4 ℃。