动物组织总蛋白粗提取测定原理

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精选答案

动物组织总蛋白粗提取测定原理通常涉及到以下几个步骤：

1. 组织破碎：将动物组织样品进行粉碎，使其达到一定的粒度，以便于后续的蛋白提取。

2. 蛋白裂解：使用适当的裂解液（如尿素、Chaps、DTT 等）破坏细胞膜和蛋白质之间的相互作用，使蛋白质从细胞中释放出来。

3. 蛋白质沉淀：将裂解后的组织悬浮液与适当的沉淀剂（如酒精、丙酮等）混合，使蛋白质沉淀。

4. 离心分离：将沉淀后的蛋白质与溶液分离，通常使用离心机进行离心分离，得到含有蛋白质的沉淀物。

5. 溶解和透析：将沉淀物溶解在适当的缓冲液中，然后通过透析或超滤等方法去除样品中的小分子物质，得到较为纯净的蛋白质溶液。

6. 蛋白质浓度测定：使用合适的蛋白质浓度测定方法（如 Bradford 比色法等）对蛋白质溶液进行浓度测定。

在这个过程中，不同的实验条件（如裂解液的配方、沉淀剂的选择、离心条件等）会影响到蛋白质的提取效率和纯度。因此，在进行动物组织总蛋白粗提取时，需要根据实际情况优化实验条件，以达到最佳的效果。

其他回答

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关键词：脑组织 目的：熟练进行脑组织蛋白质的提取 背景知识：无 原理：无 具体内容： 脑组织总蛋白质提取方法 1．将低温保存的样本称重。 2．加入裂解液。样本与组织比例=1：3~3.5 w/v，一般为150~170mg：500μl。加入50×Cocktail蛋白酶抑制剂。可利用振荡器、加样器，将组织块吹散。 3．液氮中冻融3~4次。

1min/time，室温中自然融化。 4．超声破碎。将含裂解液的EP tube埋入冰中，超声3~4sec/time，强度为最大强度的3/4。间隔10几sec。至溶液透明。小心空泡效应。 5．加入Dnase I，Rnase A。

10μg/μl，5μl。

4℃ 30min。 6．4℃ 14000g/min 离心25~30mins。 7．提上清，分装。保存。 细胞裂解液 Tris （40mM） 24.2mg 48.4 mg 96.8mg 尿素(urea) (7M) 2.102g 4.204g 8.408g 硫脲（thiourea） (2M) 0.761g 1.522g 3.044g 4% CHAPS 0.2g 0.4g 0.8g 1%二硫苏糖醇(DTT) 0.05g 0.1g 0.2g 乙二胺四乙酸二钠 1.86mg 3.72mg 7.44mg (EDTA) (1mM) 加去离子水至 5 ml 10 ml 20 ml