PCR克隆出来的基因怎么确定是我想要的

问题描述

精选答案

将PCR产物凝胶电泳，切割回收DNA长度近似的条带（凝胶回收），将回收提纯的DNA克隆至质粒载体（先酶切再连接），将载体转化至细菌扩增，提取质粒，利用质粒上已知序列作为因为对目的DNA测序，利用Blast比对测序产物与老鼠基因的近似性。

这是基因工程的一般通用步骤。综合成本及效率，测序最为省力。当然，你也可以用特异性酶切位点做一个基本判断，如果基因的同源性很高，可以不用测序。例如，老鼠基因上有一个酶切位点，如果这段基因于人类的非常相似，用该限制性内切酶切人类基因也可以得到与切老鼠基因相同的效果。