pcr反应体系中各成分的特点

问题描述

精选答案

PCR 反应体系主要由寡核苷酸(引物)、4 种dNTP、Taq DNA 聚合酶、靶序列DNA 和PCR 反应缓冲液体系组成。

设计PCR 引物时的一般原则

(1)引物长度- 一般15~ 30碱基，过短则特异性低; 过长则会引起引物间的退火而影响有

效扩增。

(2) 避免内部二级结构，避免序列内有较长的回文结构，使引物自身不能形成发夹结构。

(3) G/C 和A/T 碱基均匀分布，G/C 含量在45%~ 55% 之间，引物碱基序列尽可能选

择碱基随机分布，避免嘌呤、嘧啶的连续排列。

(4) 要避免两个引物间特别是3' 末端DNA 序列互补以及同一引物自身3' 末端的序列互

补，使它们不能形成引物二聚体或发卡结构。

(5) 引物3' 端碱基一般应与模板严格配对，并且3' 端为G、C 或T 时引发效率较高。

(6) 引物5' 端碱基可不与模板匹配，可添加与模板无关的序列(如限制性内切酶的识别

位点、ATG 起始密码子或启动子序列等)。这些与原初模板并不配对的非互补序列在后续的循

不中将被带到双链DNA 中去，这样反应产物不仅含有目的序列，同时在目的基因两侧又有了

的限制酶切位点，用相应的限制酶切割后即可将PCR 产物定向克隆到载体中。