密度梯度离心法原理

问题描述

精选答案

密度梯度离心法: 液体在离心时，其密度随转轴距离而增加。碱基GC 配对的双链DNA 片段密度较大，利用精密的密度梯度超离心技术可使切割适当片段的不同DNA 按密度大小分布开来。进而通过与某种放射性标记的mRNA 杂交来检验，分离相应的基因。

密度梯度超离心技术不仅可以分离细胞中的DNA,也可以利用它分离到生物细胞中的某些目的基因的mRNA。一般细胞含mRNA 并不丰富，大多数细胞mRNA 只占总RNA 百分之几，mRNA 种类又非常多，各种mRNA 链长短不一，总mRNA 提取出来后，提取到铺在已预制了不同密度层次溶液介质的离心管中，人们可以利用密度梯度超离心技术将大小不同的mRNA 分离在不同密度层次上，然后可以根据所需的mRNA 的大小，在相应层次上提取。

密度梯度区带离心法（简称区带离心法），是将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡，在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法。

此法的优点是：

①分离效果好，可一次获得较纯颗粒；②适应范围广，能像差速离心法一样分离具有沉降系数差的颗粒，又能分离有一定浮力密度差的颗粒；③颗粒不会挤压变形，能保持颗粒活性，并防止已形成的区带由于对流而引起混合此法的缺点是：

①离心时间较长；②需要制备惰性梯度介质溶液；③操作严格，不易掌握。