简述获得成纤维细胞过程

问题描述

精选答案

真皮成纤维细胞属于由中胚层分化而来的间质细胞。细胞来源于皮肤组织，是一种贴壁培养方式的细胞，由于这些细胞非常容易培养，它们已经被广泛用于细胞和分子生物学研究中。

成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化。成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。

一般而言，成纤维细胞能够分泌I型和III型胶原等细胞外基质，并且研究表明不同器官中的成纤维细胞有显著的不同。伤口修复时，真皮成纤维细胞由可增殖，可迁移的表型变为有收缩性的，可重塑基质的表型，同时，它们会分泌大量的透明质酸来应对修复时的炎症反应。

真皮成纤维细胞的制备方式：

1、首先在分离的细胞时要做到在无菌条件下进行，打开生物安全柜紫外灯进行30min作无菌处理。

2、将手术废弃的皮肤组织浸泡75%酒精，消毒2min。

3、将皮肤组织置含P/S的PBS中清洗至少3遍，然后用眼科剪除去脂肪及结缔组织等。

4、将皮肤剪成0.5*0.5cm小块，放入dish中，加0.1%的dispase溶液，封口膜封口，4℃冰箱过夜消化。

5、24小时后用镊子将表皮与真皮分开（薄的那层是表皮，厚的那层是真皮），

6、将真皮剪碎，移至离心管，用0.1%胶原Ⅰ型酶+0.1%胶原Ⅱ型酶+0.1%胶原Ⅳ型酶+37℃水浴锅中消化至少2h（视消化程度而定）。

7、用100μm网筛过滤，取滤液，300g，离心5min，用完全培养基重悬沉淀（每隔一天都必须换液）。

以上是真皮成纤维细胞分离培养的一种方式，不同的技术人员分离培养的方法也不同，使用的试剂比例也不尽相同。细胞纯度可高达于90%，所有的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

其他回答

期货小诸葛

一种人皮肤成纤维细胞的获得方法，包括以下步骤：

预处理：采集耳后皮肤组织，分离真皮层组织，用组织清洗液清洗干净后剪碎成组织碎块；

第一次消化：将组织碎块与组织消化液i混合，消化，消化后加入组织清洗液清洗并离心，去除上清液，保留沉淀；其中，组织消化液i为包含中性蛋白酶和dna酶的生理盐水，

第二次消化：将第一次消化后保留的沉淀和组织消化液ii混合，消化，加入胰蛋白酶，继续消化；其中，组织消化液ii为包含i型胶原酶和dna酶的dnem培养基；

终止消化：加入终止液终止消化，筛去组织块，离心，去除上清液，保留沉淀；

培养：用选择性培养基重悬沉淀，分装培养，即得人皮肤成纤维细胞。

其他回答

期货那些事

成纤维细胞是 结缔组织中最常见的细胞，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。根据细胞不同的功能活动状态，将细胞分为成纤维细胞和纤维细胞二型：成纤维细胞是功能活动旺盛的细胞，细胞和细胞核较大，轮廓清楚，核仁大而明显，细胞质弱嗜碱性，具明显的 蛋白质合成和分泌活动；纤维细胞（fibrocyte）功能活动不活跃，细胞轮廓不明显，核小体着色深， 核仁不明显，细胞质少。

此二型细胞可互相转化