qrt-pcr原理和方法

问题描述

精选答案

RT-PCR即逆转录PCR，是将RNA的反转录(Reverse Transcription,RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。可用于检测细胞中基因表达水平。

mRNA 3’端具有Poly(A)尾，Oligo(dT)与其配对，仅mRNA可被反转录，Oligo(dT)primer 对mRNA进行反转录。

核糖核酸酶H (RNase H)是一种核糖核酸内切酶，它能够特异性地水解杂交到DNA链上的RNA磷酸二酯键，故能分解RNA/DNA杂交体系中的RNA链。该酶不能消化单链或双链DNA。

反转录酶(reverse transcriptase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA（cDNA）的酶。

其他回答

拿铁工程师

利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，最终对起始模板进行精确的定量分析。

随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。

其他回答

心理学充电时间

以基因的cDNA为模板进行PCR扩增，在PCR扩增过程中，通过收集荧光信号，对PCR进程进行实时检测。

由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct 值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以可以定量。