PCR试验中引物，dntps

问题描述

精选答案

可以简单的这么理解：因为dntp与模板稳定结合的温度是非常低的，而在一般的pcr程序中，退火这一过程的温度一般都在50度以上，这相对来说算很高的温度，是不利于dntp与模板稳定结合的！所以，结果就是几乎所有的模板都跟引物结合了，这里需要纠正一点，不是模板先跟引物结合，而是一个概率的问题，没错就类似于化学上的有效碰撞理论，dntp和引物竞争模板，就数量上来说，dntp比引物可是要多得多的，与模板发生“碰撞”的几率甚至比引物更高，但能够有效结合的“碰撞”相对于引物来说是极少的！而且结合后，由于温度很高，dntp与模板形成的氢键依然会轻易地断裂，导致dntp重新成为游离的状态！最终，退火结束时，与模板结合的就基本都是引物而不是dntp了！

因此，基于这种现象，在进行pcr时，以缓慢降温退火（比如0.1℃/s，温度跨度可以在十几二十度）代替传统的退火，可以极大地提高特异性扩增！