如何提取细胞中的线粒体

问题描述

精选答案

提取新鲜心肌组织细胞内线粒体的方案：心肌组织切碎后在4 ℃介质（0.25 mol/L蔗糖、10 mmol/L Tris-HCl pH7.4，0-4℃）中制备心肌组织匀浆。匀浆经750g、离心10 min后留上清，以9000 g离心20 min 后留沉淀，重新悬浮后以9000 g再离心20 min，弃上清得线粒体.全部操作于4 ℃进行。

培养细胞提取线粒体.细胞弃去培养液后，用细胞收集液作用2到3 min，用scraper,将细胞收集起来，6000 g离心15 min。

弃上清，之后加细胞匀浆液，用匀浆器或手动匀浆管匀浆，将装有匀浆液的离心管配平后放入普通离心机，以2500 rpm，离心15 min,缓缓取上清液，移入高速离心管中，保存于有冰块的烧杯中.以17000 rpm离心20 min，弃上清，留取沉淀物。

加入0．25mol/L蔗糖与0．003 mol/L氯化钙液l ml，用吸管吹打成悬液，以17000 rpm离心20 min，将上清吸入另一试管中，留取沉淀物，加入0.1ml 0．25mol/L蔗糖与0.003mol/L氯化钙溶液混匀成悬液.即得线粒体。