载体构建单酶切后，为什么要去磷酸化

问题描述

精选答案

酶切啊，太熟悉了。 酶切是根据酶切样品的量跟酶切体系中酶的活性来确定的，如果是酶切PCR产物的话，跟你所加的保护碱基数目也是有关的。

一般做酶切的时候加的酶都是过量的，切三四个小时，可以保证获得足够干净的载体，譬如假如你切载体时间太短的话，载体不容易纯化掉，然后就会混入到你的连接产物中影响连接效率，很难挑到构建的克隆，另外酶切时间不宜太长，太长的话会把载体给切碎掉，尤其是有一些有星号活性的酶，切的时间稍微长一载体就会碎掉，影响你的实验结果。