毕赤酵母能合成维生素C吗

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精选答案

能促进合成。维生素C作为天然抗氧化剂备受青睐，但不具有脂溶性极大地限制了其应用。随着两步发酵生产技术的成熟，全球维生素C产能过剩危机严重。因此，维生素C改性对扩展其使用范围，增加其附加值，缓解产能过剩有重要的现实意义。对维生素C改性，生物法与化学法相比更具优势，但是目前生物酶制剂价格昂贵，制作繁琐。本论文对发酵法生产高效低成本的新型固定化生物催化剂-脂肪酶全细胞催化剂及其催化合成L-抗坏血酸脂肪酸酯的工艺路线进行研究。

首先对自主构建的毕赤酵母表面展示假丝酵母脂肪酶B(CALB)全细胞催化剂发酵、产酶关键条件进行优化。Invitrogen公司操作手册的基础上，优化后菌体富集BMGY培养基甘油含量为4％，装液量为25mL/250mL，转速为250r/min，发酵菌体密度OD600由优化前的24.68提高到55.4；诱导产酶BMMY培养基装液量为25mL/250mL，转速为250 r/min，甲醇的初始添加量为1％，每24h添加0.75％，诱导144h，单位发酵液的酶活力由优化前的11.7 U/mL，升高到30.5U/mL。

对毕赤酵母表面展示CALB全细胞催化剂的酶学特性进行研究。在催化对硝基苯酚棕榈酸酯的水解过程中，其最适反应pH是8，最适反应温度范围是40℃。同时，热稳定研究表明毕赤酵母表面展示CALB具有良好的稳定性，40℃恒温4h，仍能保持88％以上的水解活力。

50℃恒温6h残存酶活仍在50％以上。

L-抗坏血酸脂肪酸酯合成必须在非水相中进行，为获得干燥、催化酯合成效率高的毕赤酵母表面展示CALB全细胞催化剂，对其冻干条件进行优化。优化后的冻干条件为：pH为7.5的磷酸盐缓冲液进行pH“记忆”，油酸进行印迹，以5％脱脂乳/5％海藻糖(1：

1)作为冻干保护剂进行冻干，酶活提高5倍左右。

应用毕赤酵母表面展示CALB冻干粉在有机相中合成L-抗坏血酸脂肪酸酯。优化后的合成条件为：四氢呋喃作为反应介质，5 mL反应体系中加入L-抗坏血酸(100 mmol)和棕榈酸(L-抗坏血酸/棕榈酸=1:7)，50 mg冻干全细胞催化剂，45℃，100 r/min下转化36h，反应6h时加入350mg4分子筛。优化后下，催化反应的转化率最高达到95.5％。能合成。