pcr批不出来退火温度怎么调

问题描述

精选答案

pcr没有产物，有时候可以进行条件优化获得成功。

pcr没有产物主要有五方面原因：引物专一性不好，模板浓度偏低，退火温度偏高，聚合酶活性低，延伸时间不够等等。现在一般都采用试剂盒和推荐的优化持续，质量基本有保证，因此，常见的主要原因绝大多数与引物和模板有关。

在模板，试剂盒没有问题前提下，一般都是进行引物和退火温度优化。一般降低退火温度为tm-3～5℃，但最好不要低于50℃。最好在此范围内做一个梯度pcr，基本就能找到最佳pcr条件。如果还不能获得产物，建议重新设计引物。

其他回答

点点英语

PCR中退火的那步是引物与模板结合，一般来说，退火温度比Tm值要低上5度左右。另外，也可以根据你设计引物的软件比如primer5.0或Olige 6 推荐的温度。但这些都不是绝对的。

退火温度选择一个范围，如50-60度，PCR仪器在一排（12个孔）或一列（8个孔）中每个孔的温度都不同，你在相应的孔中放入待反应的PCR混合液（保证每孔中反应液一致），记录相应的温度，PCR产物经琼脂糖凝胶或PAGE凝胶电泳检测目的产物浓度，有无非目的产物等。