退火温度与引物的TM值有什么联系

问题描述

精选答案

1.一般来说，较低的退火温度可以提高pcr反应的敏感性但特异性较差；而较高的退火温度则可以提高pcr的特异性但却降低了扩增效率。通常引物与模板的退火温度在45-55度。

2.优化退火温度最好的方法是设置一系列对照反应，即通过在低于计算出的引物Tm值2-10度的温度范围内，进行退火的一系列平行反应来确定最佳退火温度。

也可以通过touch down pcr来设定退火温度，得到最佳退火温度。