18t载体连接步骤

问题描述

精选答案

步骤

PCR产物纯化后测定DNA的浓度，按照适当的比例与T-Vector在含有连接酶的buffer中4°过夜或37°3小时连接，然后连接产物涂筛选平板（ALB)筛选即可。

方法1、以T4连接酶进行连接的方法，这种方法的载体 有P公司、T公司，

可以说这两家公司将这两种方法发挥到了很高的水平，转化子比较多，阳性率

也不错，唯一的不足就是连接的时间长。因为连接时间越长效率越高，要达到较好的连接效率，一般要过夜连接。国内很多公司模仿这种方法制作T载体 ，不仅连接时间也很长，而且做不到P公司、T公司的阳性率和稳定性。

方法2、以拓扑异构酶(TOPO)进行连接的方法，最早采用这种连接方法的是I公司，并且申请了专利，这种方法的优势是快速连接，在5-15分钟就可以将目的基因克隆到载体 中，阳性率比较高。