底物法和速率法的区别
问题描述
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速率法a通常用在酶活性测定时,反应曲线上肯定有成线性的区域,而两点速率法又称固定时间法或一级动力学法,利用的是一级反应,在仪器上的区别主要是前者会有一个检测线性区线性度,利用最小二乘法拟合直线,计算速率;而两点速率法没有线性度检测,直接用吸光度差除以时间计算。固定时间法又被称为一级动力学法(first order kinetic)、初速率法(initial rate)、二点动力学法(two point rate)等。
在一定的反应时间内,反应速度与底物(被测物)浓度的一次方成正比,由于底物(被测物)在不断的消耗,因此整个反应速度在不断的减小,表现为吸光度的增加(或降低)速度越来越小,这类反应达到平衡的时间很长,理论上可以在任意时间段进行监测,但由于血清成份复杂,反应刚启动时反应较复杂,杂反应较多,经过一段延迟时间才能进入稳定反应期,必需在特定时间段内进行监测。
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它们的区别就是:
底物法是肝素效价检测的一种方法,又叫发色底物法。以其较好的重现性和抗干扰性而受到青睐,是USP和EP的指定方法。
速率法:是指连续测定(每15秒~1分钟监测一次)酶反应过程中某一反应产物或底物的浓度随时间的变化来求出酶反应的初速度的方法,即连续监测法。
- 其他回答
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速率法:在酶反应确定的条件下,血清中ALT和底物作用,产生丙酮酸。底物中的乳酸脱氢酶(LDH)和还原辅酶I(NADH)使丙酮酸还原成乳酸,同时还原辅酶I被氧化成辅酶I(NAD)。腐于还原辅酶I在340nm(严格讲是339nm)处有最大光吸收,因此伴随还原辅酶I不断被氧化的同时,A340。光吸收值随芬下降,下降速率和ALT活力成比例,籍此测定ALT活力。
干化学法是指将液体检测样品直接加到为不同项目特定生产的商业化的干燥试剂条上,以被测样品的水分作为溶剂引起特定的化学反应,从而进行化学分析的方法,是以酶法为基础的一类分析方法,又有干试剂化学或固相化学之称。
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